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文章導(dǎo)讀 采用PhD高壓細(xì)胞破碎法,在細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生的壓力效應(yīng),從而能夠有效地提取出蛋白質(zhì),且處理量大、破碎速度較快,這是一種機(jī)械處理細(xì)胞,物理抽提方法。
應(yīng)用情況

應(yīng)用背景

乳酸菌是一類能發(fā)酵利用糖類物質(zhì)而產(chǎn)生大量乳酸的細(xì)菌,一類無芽孢、革蘭氏染色陽性細(xì)菌,它是一類對人體有益的菌群。乳酸菌發(fā)酵能產(chǎn)生大量的有機(jī)酸、醇類及各種氨基酸等代謝物,具有抑制腐敗菌、提高消化率、防癌等生理功效。乳酸菌是一類重要的工業(yè)菌株,具有降膽固醇、降血壓、抗腫瘤和提高機(jī)體免疫等作用,被廣泛應(yīng)用于食品發(fā)酵,有著重要的經(jīng)濟(jì)價值。


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應(yīng)用案例

乳酸菌的應(yīng)用歷史非常悠久,但真正科學(xué)的研究和利用是始于19世紀(jì)中葉。近年來,利用乳酸菌系統(tǒng)表達(dá)外源蛋白也已引起廣泛關(guān)注,但由于乳酸菌屬于革蘭氏陽性菌,具有厚而致密的剛性細(xì)胞壁,致使乳酸菌內(nèi)源蛋白、表達(dá)的非分泌性外源蛋白以及其他非分泌性代謝產(chǎn)物的提取效率極低。因此,研究乳酸菌破壁方法以提高乳酸菌蛋白以及各種代謝產(chǎn)物的獲得率具有重要的意義和應(yīng)用價值。我們需要根據(jù)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和化學(xué)組成選擇合適的破壁方法,采用微生物發(fā)酵提取技術(shù),高壓細(xì)胞破壁儀可以通過空化效應(yīng)引起的沖擊波和剪切力使細(xì)胞破碎,提取乳酸菌內(nèi)源蛋白、表達(dá)的外源蛋白以及多種代謝產(chǎn)物。


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應(yīng)用方案

通過高壓細(xì)胞破碎儀使物料在柱塞作用下進(jìn)入可調(diào)節(jié)壓力大小的閥組中經(jīng)過特定寬度的限流縫隙均質(zhì)區(qū)在均質(zhì)閥內(nèi)產(chǎn)生三種效應(yīng):空穴效應(yīng)、撞擊效應(yīng)、剪切效應(yīng)的機(jī)械作用力從而打破細(xì)胞壁的束縛,把蛋白質(zhì)從組織或細(xì)胞中釋放出來盡可能保持原來的天然狀態(tài),不喪失活性,達(dá)到高效率破碎細(xì)胞的效果。即使用高壓勻漿破碎法采用高壓細(xì)胞破碎法,在細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生的壓力效應(yīng),從而能夠有效地提取出蛋白質(zhì),且處理量大、破碎速度較快。這是一種機(jī)械處理細(xì)胞,物理抽提方法。


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解決方案

首先富集菌體,收集胞內(nèi)產(chǎn)物的細(xì)胞或菌體。然后進(jìn)行細(xì)胞重懸,用適當(dāng)?shù)木彌_液或培養(yǎng)液將離心或沉降等方法得到的固體(沉淀、細(xì)胞、活性物質(zhì)等等)重新懸浮。其次進(jìn)行細(xì)胞破碎,使產(chǎn)物轉(zhuǎn)移到液相中。最后收集含生化物質(zhì)的液相,進(jìn)行碎片分離,分離除去細(xì)胞、菌體、細(xì)胞碎片、蛋白質(zhì)的沉淀物和絮凝體等固體懸浮物,得到上清液或濾液。然后從澄清的濾液中提取胞內(nèi)產(chǎn)物,從細(xì)胞裂解物中獲取目標(biāo)產(chǎn)物。


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PhD優(yōu)勢

胞內(nèi)表達(dá)的優(yōu)點是表達(dá)量高,糖基化程度很低或無糖基化,由于是在胞內(nèi)進(jìn)行表達(dá),因此對培養(yǎng)基及發(fā)酵條件要求不高,不易造成蛋白質(zhì)的降解,并且胞內(nèi)表達(dá)的重組蛋白具有良好的活性和生物安全性,更容易實現(xiàn)高密度發(fā)酵表達(dá)目的蛋白等,尤其是針對需要表達(dá)且不會過糖基化且有生物活性的異源蛋白,采用胞內(nèi)表達(dá)更為合適,但是胞內(nèi)表達(dá)需要對細(xì)胞進(jìn)行破碎才可以收集產(chǎn)物。采用高壓細(xì)胞破碎法,在細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生的壓力效應(yīng),從而能夠有效地提取出蛋白質(zhì),且處理量大、破碎速度較快。這是一種機(jī)械處理細(xì)胞,物理抽提方法。

◆破壁能力:高壓設(shè)計,輕松上壓;均質(zhì)效率高,工藝穩(wěn)定;穩(wěn)定的破碎能力,更高的胞內(nèi)物提取;純機(jī)械破碎,無化學(xué)污染;可放大工業(yè)化生產(chǎn)工藝設(shè)備

◆控溫效果:獨特溫控設(shè)計,內(nèi)置和外置雙向控溫,確保均質(zhì)過程及出料溫度可控。

◆活性保障:循環(huán)的控溫系統(tǒng),蛋白活性不失活,細(xì)胞破碎后,活性保值高達(dá)99%                                                                 

◆無菌保障:金屬結(jié)構(gòu)連接,沒有O型圈或墊片,無死角設(shè)計;在線排空結(jié)構(gòu)設(shè)計;所有機(jī)型均可實現(xiàn)在線清洗(CIP)、循環(huán)清洗、拆裝清洗、在位滅菌(SIP)


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